Profil myozitídy - Blot

InformovaťÞii Všeobecné a odporúčania na stanovenie profilu myozitídy

Idiopatické zápalové myopatie sú skupinou stavov charakterizovaných slabosťou proximálnych svalov končatín, svalovou atrofiou, biochemickými a elektromyografickými znakmi poškodenia svalov, histologickými abnormalitami, charakteristickými zmenami kože. Vyskytujú sa s incidenciou 0,1-1/100 000 obyvateľov/rok a sú bežnejšie u žien. Táto skupina zahŕňa: polymyozitídu, dermatomyozitídu, myozitídu s inklúznymi telieskami, myozitídu spojenú s neopláziou (paraneoplastický syndróm) a myozitídu spojenú s inými ochoreniami spojivového tkaniva 6; 7 .

Rovnako ako pri systémovej skleróze, špecifické autoprotilátky hrajú dôležitú úlohu v diagnostike a klasifikácii rôznych variantov týchto stavov (vrátane syndrómov prekrytia), najmä preto, že prevalencia antinukleárnych protilátok je v porovnaní s lupusom výrazne nízka (40 - 60%). systémový erytém. Tieto autoprotilátky rozpoznávajú viac antigénnych cieľov: typy transferovej RNA (tRNA), aminoacyl-t-RNA syntetázy, komponenty rozpoznávania signálu (SRP), translačné faktory, zložky remodelačného komplexu. nukleozómy, ale najdôležitejšie sú tie namierené proti aminoacyl-t-RNA syntetázam (skupina enzýmov nachádzajúcich sa vo všetkých jadrových bunkách a ktorých úlohou je pripojiť určitú aminokyselinu k svojej vlastnej tRNA). Prítomnosť autoprotilátok je spojená s určitými podskupinami ochorenia, ktoré majú prediktívnu hodnotu pre rôzne klinické prejavy a pre prognózu ochorenia 1; 2; 6; 7. .

Anti-Jo-1 protilátky sú namierené proti enzýmu histidyl-t-RNA syntetáza. In vitro sa tieto autoprotilátky viažu na konformačné epitopy enzýmu a inhibujú jeho katalytickú aktivitu. Antigén je v dimérnej forme a nachádza sa v cytoplazme; molekulová hmotnosť podjednotiek je 50 kDa. Prevalencia anti-Jo-1 protilátok v polymyozitíde a dermatomyozitíde je 20 - 40%; autoprotilátky možno zistiť skoro, niekedy pred nástupom príznakov. U detí sú protilátky anti-Jo-1 extrémne zriedkavé. Pacienti s protilátkami anti-Jo-1 majú typickú triádu symptómov: polymyozitída (> 90%), polysynovitída (artralgia, neerozívna deformujúca artritída, tenosynovitída v 50% prípadov), fibrotizujúca alveolitída alebo pľúcna fibróza (60%). Môžeme tiež pridať: Raynaudov fenomén (40%), horúčka (20%), „ruka mechanika“ (30%). Tento stav je známy ako syndróm anti-syntetázy. Viac ako 90% kaukazských pacientov s anti-Jo-1 má alelu HLA DR3 1; 4; 6; 7 .

Aj keď protilátky zamerané na iné aminoacyl-t-RNA syntetázy: anti-PL-7 (syntéza anti-treonyl-t-RNA), anti-PL-12 (anti-alanyl-t-RNA syntetáza), anti-EJ (anti-glycyl-t-RNA syntetáza) a anti-OJ (anti-leucyl-t-RNA syntetáza) sú oveľa menej časté ako anti-Jo-1, sú spojené s rovnakými klinickými prejavmi kompatibilnými s syntetáza 6. Zvyčajne má jeden pacient iba jeden typ anti-syntetázovej protilátky, boli však opísané aj prípady, v ktorých bolo detegovaných všetkých 5 autoprotilátok. Syntéza anti-syntetázy reaguje mierne na liečbu kortizónom. Pretože všetky syntetázy sa nachádzajú v cytoplazme (miesto syntézy proteínov), spôsobujú autoprotilátky jemný cytoplazmatický vzhľad v nepriamej imunofluorescencii pri použití buniek Hep-2 ako substrátu. .

Anti-PL-7 sa vyskytujú s prevalenciou 3–6% u pacientov s myozitídou, najmä pri syndrómoch prekrývania (SLE, systémová skleróza, intersticiálna pľúcna fibróza).

Anti-PL12 sú zistené s prevalenciou 3% u pacientov s myozitídou.

Anti-EJ a anti-OJ vyskytujú sa pri polymyozitíde, ale aj pri syndrómoch prekrývania .

Anti-Mi-2 protilátky sú namierené proti nukleárnej helikáze (komplex nukleárnych proteínov zapojený do regulácie transkripcie); sa vyskytujú u 15 - 30% pacientov s dermatomyozitídou (majúcich vysokú špecifickosť pre tento stav) a zriedkavo u pacientov s polymyozitídou. Väčšina pacientov s protilátkami anti-Mi-2 je nositeľom alely HLA DR7. Forma ochorenia je benígna, s dobrou odpoveďou na liečbu kortizónom 6; 7 .

Anti-Ku protilátky sú namierené proti nukleolárnemu proteínovému antigénu heterodimérového typu, zloženému z dvoch podjednotiek s molekulovou hmotnosťou 70, respektíve 80 kDa, zložkou komplexu enzýmu proteínkináza závislá od DNA. Tento komplex hrá dôležitú úlohu v bunkových procesoch súvisiacich s transláciou, opravou DNA a preusporiadaním génov podieľajúcich sa na syntéze imunoglobulínov, ako aj receptorov T buniek. Anti-Ku protilátky sa nachádzajú v širokej škále chorôb spojivového tkaniva, v najmä syndrómy prekrývania sklerodermie-myozitídy, ale aj SLE (3 - 10%). Vzhľad v nepriamej imunofluorescencii je granulovaného typu (bodkovaný); Bola tiež opísaná asociácia s alelou HLA DQw1. Prevalencia anti-Ku protilátok pri autoimunitných ochoreniach je rôzna a dôležitým prvkom je etnická príslušnosť. Napríklad prípady SLE spojené s anti-Ku protilátkami boli hlásené v Severnej Amerike a Európe, ale nie v Japonsku. Primárny Sjögrenov syndróm, ako aj primárna pľúcna hypertenzia, sú ďalšie klinické stavy bežne spojené s anti-Ku.

Anti-PM-Scl protilátky sú namierené proti nukleolárnemu komplexu zloženému z 11-16 polypeptidov, ktorých funkcia ešte nebola stanovená 6. Protilátky sa detegujú u viac ako 90% prípadov syndrómu prekrytia sklerodermia-polymyozitída (sklerodermatomyozitída), ale iba u

8% všetkých prípadov myozitídy a

3% všetkých prípadov sklerodermie 5. Prognóza je u tejto skupiny pacientov relatívne priaznivá. Je spojený s HLA DR3 a anti-nukleárnymi protilátkami s homogénnym nukleolárnym vzhľadom v imunofluorescencii 2; 6. Dve hlavné autoprotilátky sa v laboratóriu detekujú osobitne: anti PM-Scl100 a anti PM-Scl75 3 .

Anti-SRP („Častica rozpoznávajúca signál“) reaguje s 54 kDa zložkou komplexu SRP, ktorá sprostredkováva transport novo syntetizovaných proteínov do endoplazmatického retikula. Boli popísané u pacientov s polymyozitídou a dermatomyozitídou (až 4% prípadov), najmä u čiernych žien. Anti-SRP sú markery nekrotizujúcej myopatie charakterizované silnou proximálnou a symetrickou akútnou slabosťou kostrového svalstva spojenou s bolesťou svalov; postihnutý je aj srdcový sval. Ochorenie je spojené so zvýšenou úmrtnosťou a slabou odpoveďou na liečbu kortizónom 6; 7 .

Anti-Ro52 sú zamerané proti 52 kDa antigénu a boli opísané ako nešpecifické autoprotilátky spojené s reumatickými a nereumatickými chorobami. Sú 100% prítomné u matiek plodov alebo novorodencov s vrodeným atrioventrikulárnym blokom alebo novorodeneckým lupusom 6. Určité percento pacientov s polymyozitídou/dermatomyozitídou má anti-Ro52 v kombinácii s anti-aminoacyl-t-RNA syntetázovými protilátkami (najmä anti-Jo-1) 1; 2 .

Výcvik pacientov - à jeun (na prázdny žalúdok) alebo po jedle (po jedle) 3.

Odobratý exemplár - venózna krv 3 .

Zberová nádoba Vacutainer bez antikoagulancia s/bez separačného gélu 3 .

Po zbere potrebné spracovanie - oddeľte sérum odstredením 3 .

Objem vzorky - minimálne 1 ml ser 3 .

Dôvody zamietnutia skúsiť

Stabilita vzorky - separované sérum je stabilné 14 dní pri 2 - 8 ° C a dlhšiu dobu pri -20 ° C. Nerozmrazujte a nezmrazujte 3 .

Metóda - imunoblot. Použité antigény sú natívne (Jo-1) a rekombinantné.

Prúžky pozostávajú z membránových čipov fixovaných rôznymi purifikovanými antigénmi: Mi-2, Ku, PM-Scl 100, PM-Scl 75, Jo-1, SRP, PL-7, PL-12, EJ, OJ, E-52.

V prvom kroku sa prúžok naplnený purifikovanými antigénmi inkubuje spolu so zriedeným sérom pacienta. Ak sú v sére špecifické protilátky, viažu sa na zodpovedajúce antigény na prúžku. Po premytí sa prúžok inkubuje s ľudským anti-IgG konjugátom značeným alkalickou fosfatázou. Konjugát sa pripojí k IgG časti komplexu antigén-protilátka. Po premytí sa nenaviazaný konjugát odstráni, pridá sa farbiaci roztok (enzýmový substrát) - kolorimetrický enzýmový detekčný systém. Ak je viazaný konjugát prítomný, enzymatická reakcia vygeneruje tmavomodrý produkt v pásoch obsadených špecifickými protilátkami. Pásy vizualizované v páse sú teda výsledkom väzby špecifických protilátok na jednotlivé antigény v páse.

Na každom páse je vnútorný kontrolný pás. Výskyt intenzívnej farebnej reakcie na tejto úrovni potvrdzuje, že všetky fázy testu imunoblotu boli vykonané správne 3 .

Konečná interpretácia výsledkov testu sa vykonáva pomocou softvéru (po skenovaní prúžkov), ktorý v závislosti na intenzite signálu poskytne skóre pre každé pásmo prúžku takto:

HODNOTENIE SIGNÁLU

INTENZITA SIGNÁLU

Referenčné hodnoty